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乳酸菌如何提高活菌数

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dongyan121 发表于 2008-10-20 16:58:00 | 显示全部楼层 |阅读模式
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我做的一株菌的活菌数一直是十的七次方,想提高一下活菌数,后来改变了葡萄糖和蛋白胨的种类和比例,从OD值测定后数值是提高了,但是经过平板计数后活菌数基本没什么提高,大家请指教啊,急求,我已经做了两个月这方面的试验了,就是没有提高,真实郁闷
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诗琪 发表于 2008-10-20 17:30:00 | 显示全部楼层
没做过!
希望做过的朋友能帮助到你!
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硅化木 发表于 2008-10-20 18:14:00 | 显示全部楼层
首先,我不是做微生物的,但我做过酸奶。我觉得你先要说明你要提高的是什么菌的活菌数(双歧杆菌,嗜酸乳杆菌,保加利亚乳杆菌,嗜热链球菌,还是其它什么菌)每种菌都有适合自已生长的温度、PH值、培养基等一系列条件,包括最适、共生的条件。不是改变一下培养基就可以的。
有两份资料,希望对你有所帮助
基本菌株:保加利亚乳杆菌
保加利亚乳杆菌这个名称是将保加利亚这个国家的名称加以拉丁语化而形成的,现已更名为德氏乳杆菌保加利亚亚种(L.delbrueckii subsp.bulgaricus),属于乳杆菌属的热细菌亚属,或专性同型发酵群。L.delbrueckii subsp.bulgaricus是典型的来自牛乳的乳酸菌,最初是从发酵乳中分离出来的。它是一种非常重要的乳酸菌,产生乳酸能力很强,常用于酸奶、乳酸菌饮料、瑞士干酪等发酵制品的发酵剂。
①细胞呈杆状,两端钝圆,平均大小为(0.5~0.8)∪m×(2~9)/∪m,继续培养20~24h之后细胞会逐渐延长,可达15~30/∪m,有时可达500∪m,生长旺盛的菌体主要成单或成链排列。
②能够发酵的糖的种类比较少,不能发酵蔗糖和麦芽糖。可以利用乳中乳糖产生D(+)型乳酸和乙醛,一些菌株还能生成EPS。
③最适生长温度为45℃,一般在10℃以下很少生长,大多数菌株在50~55℃范围内都能生长。
④细胞壁的肽聚糖结构为Lys-Dasp。L.delbrueckii subsp。bulgaricus在乳中显示出缓和的蛋白质分解活性,可蓄积较多种游离氨基酸。有的菌株还具有产生H2S,的能力,还有的菌种可将某些氨基酸转化成有机酸,在NAD氧化酶的作用下,产生过氧化氢。L.delbrueckii. subsp.bulgaricus在乳中显示微弱的脂肪酶活性。嗜热链球菌嗜热嗜热链菌(S.thermophilus)是一种非常有益的乳酸菌,与L.delbrueckii subsp.bulgaricus一起构成乳制品的传统发酵剂,在发酵乳及乳酸菌饮料工业上占有重要地位。其特征如下。
①      形态为球形或卵形,直径小于1Um,一般成对或成链状生长。②培养基和培养温度可影响其形态,在15℃时不能生长,在45℃时培养会增加不规则细胞的产生大多数菌株在50℃下能够生长,在60℃下加热30rain仍能存活。③均为革兰阳性菌,无运动性,厌氧同型乳酸发酵,利用乳中的乳糖生产L(+)型乳酸、乙醛和丁二酮。
④一些菌株能够生产EPS,维生素B和一些氨基酸能够促进EPS的产量。⑤在亚甲基蓝存在的情况下,或者在pH9.6时不能生长。⑥细胞壁的肽聚糖结构为Lys-Ala2—3,16SrRNA序列证明S.thermophilus 以及Streptococcus vestibularis有着密切的关系。
⑦目前还没有关于血清学方面的免疫抗原鉴定。益生菌菌株双歧杆菌一个健康成人肠道大约有400多种肠内菌,其细菌数量在1000亿亿个,其重量有1Kg,其体积相当于肝脏大小。双歧杆菌(Bifidobacterium)是1899年由法国巴斯德研究院Tisser首先从健康母乳婴儿的粪便中分离出来的。到目前为止,发现的双歧杆菌有30多种,它们来自于人、动物(牛、羊、兔、鼠、猫和鸡等)、鸟的肠道、人类阴道,不过其中只有六种引起人们的重视并应用到乳品工业中来制造具有生物活性的发酵酸奶。这六种菌分别为Bifidobacterium
adolescentis、breue、bifidum、infantis、lactis、longum,这些菌已经从人体内得到分离并已经用于制作发酵乳。双歧杆菌是在这些众多的肠菌群中占有非常重要位置,双歧杆菌与宿主的关系是属于肠道微生态学重要组成部分;双歧杆菌与宿主、肠内其它正常菌群中的各菌属保持相互关系的同时又在定性、定量、定位、与宿主保持相互制约的关系。双歧杆菌在人体小肠下部、大肠上部定植。肠道内双歧杆菌数量的多少是衡量健康、长寿、容颜肤色的关键指标。双歧杆菌的一些基本特征如下。
①专性厌氧,革兰阳性,在好气条件下不能生长,不过不同菌种和菌株对氧的敏感性有所不同。形状不规则,不运动,无芽孢,呈短杆或者长杆状[(0.5~l.3)Ux(1.5~8)>Um。
②)厌氧条件下,在TPY(pticasephytone yeast)培养基上培养,细胞的形态变得很特殊,多呈Y字形、v字形、弯曲形或匙形等。
③尽管菌种间细胞壁的肽聚糖不同,但它们都是由N一乙酰胞壁酸和N一乙酰葡萄糖胺分子组成,只不过链的长短有所区别。
④不同类型的双歧杆菌对糖类的发酵类型不同,利用这一特点可以鉴定双歧杆菌。这里涉及到一个关键酶,即6一磷酸果糖磷酸酮酶(F6PPK),亦被称为“双歧旁路,这种酶可以用来鉴定菌体基因。值得说明的是并非所有的双歧杆菌都可以产生足够的F6PPK以供检测,在这个途径中,2分子的葡萄糖发酵生成2分子的乳酸和3分子的乙酸。
⑤DNA中的G+c含量范围在54%~67%。
⑥很多化合物都可以促进双歧杆菌的生长,称之为增殖因子。
双歧杆菌细胞呈多种形态,有短杆较规则形状或纤细杆状带有尖细末端的细胞,有成球形者,也有长而稍弯曲状的或呈各种分枝或分叉形,如Y字形、V字形、X字形、棍棒形或匙形等。一般呈单个或链状,V形、栅栏状排列,或者聚集呈星状。双歧杆菌的细胞形态受培养条件的影响,若进行传代培养变成直杆状或弯曲状杆菌的倾向很强,初代分离时必须在厌氧条件下进行,但由于多次继代培养,在好气性平板上有时也能够缓慢生长,不过不能完全成为好气菌。在不利的培养基上培养双歧杆菌,会产生较多分枝细胞,例如:在B-甲基一D-葡萄糖胺缺少的培养基中,双歧杆菌的分枝很多,然而在其中加入某种氨基酸(如丝氨酸、丙氨酸)后,可以将X形或Y形的细胞转变成弯曲棒状形(Glick等,1960)。1994年Samona和Robinson也做了类似的实验,他们通过在培养 基中加入NaCl将球形的B.bifidum转变成了Y形,但是B.longum和B.adolescentis不会出现同样的效果。他们还同时指出,随着细胞形态的变化,糖类的发酵类型也发生了变化,这可能是因为细胞形态的改变引起了细胞膜对某些种类的糖的渗透能力的变化,以至于影响了对这些糖类的代谢。嗜酸乳杆菌
嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)是来自肠道的乳酸菌,最初是从婴儿的粪便中分离出来的,是人和动物肠道菌群中很重要的一种益生菌。嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)在大肠定植。嗜酸乳杆菌的特征如下:
①与L.delbrueckii subsp.bulgaricus一样属于乳杆菌属的热细菌亚属,或Aa群,即专性同型发酵群。
②细胞个体形态为杆状,两端钝圆。细胞大小通常为(0.6~O.9)um×(1.5~6)um,成单、成双或2~3个成短链排列,九鞭毛。不运动,无孢子,革兰染色呈阳性。其细胞壁上的蛋白质对于菌体吸附在肠道壁上有着非常重要的作用。
③菌落通常粗糙,培养基中加人吐温-80或油酸钠时,菌落由粗糙变为光滑和致密状。用显微镜观察粗糙的菌落时,观察到缠绕的微毛丝状物。深层两落呈放射或分枝形的不规则状。无特有的色索。
④厌氧或兼性厌氧,在15℃以下不生长。最适生长温度为35℃,在22℃以下产酸性受到抑制。最高生长温度为48℃、。最适生长 pH值为5.5~6.O,生长初始pH值为5~7。
⑤近来的研究表明L.acidophilus包括六种基因组类型。
⑥生长需要乙酸、甲基戊酸、核黄素、叶酸和尼克酸。但并不需要其他的B族维生素。
⑦细胞壁的肽聚糖结构为Lys-Dasp。根据1992年 Mital和Garg的报道。大多数L.acidophilus菌株的生长要求都很复杂,L.acidophilus的最基本生长环境是要定值在哺乳动物的小肠壁上。这个基本要求倒是比较容易达到。L.acidophilus进入肠道后,能代谢糖类产生乳酸等物质。使得肠道内pH值下降。抑制肠道球菌、牛痘、脊髓灰质炎病毒和生孢菌的作用,维持畅道有益菌群的活性。同时这种有益的乳酸发酵将会代替腐败性发酵,能协调人体由于施用抗生素或射线治疗以及劳累过度等情况造成的肠道菌群失调,具有整肠作用。由于有益代谢,能很好地降低粪便细菌酶的形成水平,因此可以抑制致癌前物质的形成,并能有效地降低人体内胆固醇的含量。同时,L.acidophilus还能代谢乳糖,对乳糖不耐症有一定地疗效作用。现代研究结果也认为,L.acidophilus的疗效作用主要是由于它的代谢产物能有效的促进肠胃的蠕动。不过,L.acidophilus的生长还需要脂肪酸、矿物质、肽类和氨基酸、核酸衍生物以及B族维生
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qigong18 发表于 2008-10-20 19:16:00 | 显示全部楼层
呵呵,很简单,离心后重新悬浮到少量培养基中不就提高浓度了?不知道楼主是什么特别要求请告知后再帮你想办法。
[ 本帖最后由 qigong18 于 2008-10-20 19:18 编辑 ]
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硅化木 发表于 2008-10-20 19:20:00 | 显示全部楼层
原帖由 qigong18 于 2008-10-20 19:16 发表
呵呵,很简单,离心后重新悬浮到少量培养基中不就提高浓度了?不知道楼主是什么特别要求请告知后再帮你想办法。
呵呵,相当于浓缩了
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芙蓉 发表于 2008-10-21 08:54:00 | 显示全部楼层
没做过,正好学习了......
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zgfp82 发表于 2008-10-21 09:16:00 | 显示全部楼层
不知道你是在高密度培养吗?不知道具体情况,实在不好回答你,正如有些朋友所说的,简单的浓缩就可以提高菌体密度了。但如果是高密度培养,这显然是不符合要求的。
当然,如果是高密度培养,这个问题其实是很好解决的,因为乳酸菌的高密度培养已经有很多研究,你可以查查相关的资料。据我所知,你可以从培养基组成,生长条件,生长因子,培养方法等方面着手。
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homerliu 发表于 2010-7-5 00:56:00 | 显示全部楼层
来学习啦  谢谢楼上的
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笨笨锅 发表于 2010-8-3 11:21:00 | 显示全部楼层
貌似很专业  我只是来看看 嘿嘿
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笨笨锅 发表于 2010-8-3 11:22:00 | 显示全部楼层
貌似很专业  我只是来看看 嘿嘿
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