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免疫亲和柱净化——莲子中黄曲霉毒素B1,B2,.G1,G2检测方案

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taileqi001 发表于 2012-8-7 14:02:00 | 显示全部楼层 |阅读模式
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免疫亲和柱净化——莲子中黄曲霉毒素B1,B2,.G1,G2检测方案 莲子,其味清香,营养丰富。具有补脾、益肺、养心、益肾和固肠等作用。适用于心悸、失眠,体虚、遗精、白带过多、慢性腹症等症。莲子不仅是珍贵的保健食品,还是一味很有价值的中药材。但是近日得知:2012年2月23日,日本厚生劳动省医药食品局食品安全部监视安全课发布食安输发0223第2号和第5号:将中国产莲子中黄曲霉毒素(AF)由命令检查转为强化监控检查。 莲子多产于湖南、湖北、福建等南方温湿地区,其气候条件适宜黄曲霉的生长。黄曲霉毒素(AF)只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。极有可能感染霉菌并产生黄曲霉毒素,进而对消费者的身体健康造成危害。由此可以推断喜爱食用莲子的人们很有可能已经食用了含有黄曲霉毒素的莲子,为了保护广大消费者的利益,有必要对莲子的AF的污染情况进行检测。 《中国药典》对部分中药材中AFB1的限量规定为5µg/kg,黄曲霉毒素总限量为10µg/kg。 目前来讲,黄曲霉毒素AFT的检测方法有高效液相色谱法(HPLC),酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测中药材中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素残留。 泰乐祺科技作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的供应商,泰乐祺检测应用实验室重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等问题,针对上述情况,提出了以下解决方案。 免疫亲和柱+KRC光化学柱后衍生法1. 简介PriboFast黄曲霉毒素B+G免疫亲和柱(编号IAC-010-3)可选择性吸附样品液中的毒素,从而对毒素样品起到非常针对性的纯化作用,然后用HPLC/FLD+KRC柱后衍生系统可以有效的测定黄曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、浓度,提高检测的准确性和灵敏度。 2. 免疫亲和柱/KRC衍生法特点:
• 采用高特异性的抗体。• 柱容量高、柱体积大,稳定的纯化效率; • 柱内胶含量高,保证稳定的回收率;• 符合国内外限量标准• 纯化后直接用于ELISA 法,高效液相色谱法,荧光光度法等。• 适用于各种复杂基质样品处理
• 衍生化操作方便,光化学衍生化无需使用衍生试剂(通常电化学柱后衍生均需要使用衍生试剂,分析成本高,操作麻烦,仪器故障率较高)。
• 回收率高,达到90%以上3. 免疫亲和柱法操作步骤简介:1)样品处理•准确称取25g粉状样品,溶于125ml甲醇/水(70/30)中;.加入5.0g氯化钠以均质器高速搅拌,提取2分钟;.4000r/min离心5min或用槽纹滤纸过滤;.取15mL滤液并加入30mL水稀释,用玻璃微纤维滤纸过滤;.取稀释后液体待测;.将免疫亲和柱连接于20.0mL玻璃注射器下。准确移取15.0mL样品提取液注入玻璃注射器;.将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约6mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体;.以10.0mL水淋洗柱子2次,弃去全部流出液,并使2mL~3mL空气通过柱体;.准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱,流速为1 mL/min ~2mL/min,收集全部洗脱液于玻璃试管中,供检测用。 •2)测定:HPLC直接进样,经黄曲霉毒素专用色谱柱、KRC光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1B2G1G2浓度;Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC参数(符合GB23212-2008) PriboFast KRC-25 柱后光化学衍生器         紫外灯波长:254 nm
HPLC-色谱柱 :黄曲霉毒素专用色谱柱   150 x 4.6 mm; C-18
流  动  相  :甲醇-水  45:55
流      量  : 1.0 mL/min                    柱      温  : 35 °C
进 样 体 积 : 20μL
荧光检测器  : λ-激发波长:365nm           λ-发射波长:455 nm液相色谱仪检测配置;高效液相色谱仪带有荧光检测器;
Pribofast KRC-25 柱后光化学衍生装置,配有纳米灯管254nm,25米FTFE线圈。
黄曲霉毒素专用色谱柱 C18 150 x 4.6 mm下图中色谱峰依次为AFT  G2G1B2B1
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 楼主| taileqi001 发表于 2012-11-5 08:43:00 | 显示全部楼层
泰乐祺实验室—专业的霉菌毒素检测技术服务商
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