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精益生产推荐读物《精益思想》

用ELISA试剂盒测黄曲霉毒素B1

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lljljj 发表于 2014-9-2 17:39:00 | 显示全部楼层 |阅读模式
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现在用ELISA试剂盒测黄曲霉毒素B1,酶标法,遇到几个问题。
1、头一次做这个方法,用不用做回收率?
回收率怎么做?
2、做了两回标准曲线,R值都是0.8几,上不了9,怎么能让R值到0.9以上?
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 楼主| lljljj 发表于 2014-9-2 21:25:00 | 显示全部楼层
没有人来解答一下我的困惑吗。。。。
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园园熊 发表于 2014-9-10 09:36:00 | 显示全部楼层
平时不做回收率的,上次要做能力验证,做过回收率,大概只有75%左右。
标准曲线的确很难做,一般我做到95%以上就算很不错了,注意点(这是我不断摸索中得出来的):孔要平衡到室温,这点挺重要的;要用洗涤液洗一下孔,起到复苏孔的作用;在用移液枪吸时,注意慢吸快放,并且要经常注意移液枪的刻度会不会变,有时不小心会移动的;最好用同一只移液枪移所有的试剂,这样大家的误差都一样了;注意所有的试剂全用移液枪吸,有些厂家说直接用滴一滴也可以,这个对做标准曲线来说太不准了;再就是洗板,一定不能满出孔,这个要非常注意。暂时想到这些,你可以到辽宁检验检验局去买些能力验证的花生粉做一下回收,我们两年就要做一次,希望你好运。
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精益生产必读书籍
回笼饕餮 发表于 2014-9-13 12:50:00 | 显示全部楼层
按照说明书做,重复洗板的时候多洗1-2遍,摇动的时候不要太剧烈,点板速度要快,吸样品的速度要慢,倒板的不要交叉污染。
样品处理的时候注意平行样的称样量,用之前要和标液一样用漩涡振荡器摇匀,同时多做平行样
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qianjianrui1234 发表于 2014-9-13 15:06:00 | 显示全部楼层
要做回收率,采用加标方法;
酶标法操作的最大影响是:点板、洗版操作;要多练,熟能生巧
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qiujuyu1120 发表于 2014-9-10 09:36:00 | 显示全部楼层
正常回收率是每次试验和标准曲线一起做的,而且有条件建议所有都要做双孔平行,不过这个看实验室条件,严格按照实验标准操作,酶标仪开机预热,试剂盒回温,前处理样品溶液提取,上板操作,移液枪吸二打一,洗板,加试剂过程中要干净利落,一般建议放在恒温培养箱避光反应,冬天室温低,可以根据颜色反应根据经验适当延长或者缩短反应时间,标曲的线性最好达到99吧,如果还是有问题,建议试剂盒厂家上门指导吧。
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